細(xì)胞傳代的一般方法

開始細(xì)胞傳代前，仔細(xì)檢查細(xì)胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全：一般主要有：細(xì)胞(單層細(xì)胞，鏡檢適合)、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液或MEM 培養(yǎng)液或199 等適合細(xì)胞有要求的培養(yǎng)液)、滅活小牛血清、*溶液（1 萬單位）、7.5％NaHC03 溶液、0.25％*、PBS 洗液。

用具：小方瓶(100m1)、克氏瓶、膠塞、吸管(10ml、1m1）、細(xì)胞吹打管（20 ml）(以上用具需經(jīng)121℃至
少15 分鐘高壓滅菌)、C02 孵箱、超凈臺(tái)、倒置顯微鏡、4℃、—20℃冰箱

操作步驟：鏡檢細(xì)胞，挑選生長狀態(tài)良好，細(xì)胞界限清晰，具有立體感，形態(tài)好無污染、無異常及可疑病變細(xì)胞。配制細(xì)胞培養(yǎng)液：按以下配比配制MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液100ml 內(nèi)，加入滅活小牛血清10m1，*溶液0.3m1，7.5%*溶液3ml。（僅供一般參考）。消化細(xì)胞；先用PBS 洗液沖洗細(xì)胞表面1-2 次，每次10m1，棄去洗液，向細(xì)胞瓶內(nèi)加入0.25％*溶液，每瓶1m1，細(xì)胞瓶平放，使消化液*覆蓋細(xì)胞表面。至細(xì)胞*脫落到*中。每瓶加入10m1 細(xì)胞培養(yǎng)液吹打分散細(xì)胞，按所需的傳
代比例分裝于小方瓶(100m1)中，再加入10m1 細(xì)胞培養(yǎng)液重復(fù)吹打一次后分裝，然后補(bǔ)加至所需培養(yǎng)量。加塞，置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2～4 天成片。(由細(xì)胞接種濃度決定)；填寫傳代記錄。