中文名稱：腎小球基底膜抗體檢測試劑盒

英文名稱：GBMELISA KIT

規(guī)格：96T/48T

保存條件：2-8℃

腎小球基底膜抗體檢測試劑盒用 途：用于定量檢測血清、血漿及相關(guān)液體樣本中腎小球基底膜抗體 的含量。

間接ELISA方法用以檢測血清中抗體，包被抗原為自己原核表達(dá)純化蛋白，已通過瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢驗(yàn)（純化抗原與陽性血清有沉淀線，而陰性血清無）。用該抗原做方陣試驗(yàn)，抗原梯度為0.3，0.6，0.9，1.2，1.5，1.8，2.1微克，血清分別稀釋1:5,1:10,1:50,1:100,1:200,1:300。步驟如下：

① 取空白酶標(biāo)板，于每孔中加入純化蛋白溶液100μL ，于振蕩器上震蕩混勻，用封口膜封蓋酶標(biāo)板，室溫包被一夜。

② 取下封口膜，棄去酶標(biāo)板內(nèi)溶液，用洗劑液（1×PBST）洗劑酶標(biāo)板5次，zui后一次吸干。每孔加入1%BSA封閉液100μL， 37℃封閉1h。

③取下封口膜，棄去酶標(biāo)板內(nèi)溶液，用洗劑液（1×PBST）洗劑酶標(biāo)板5次，zui后一次吸干。每孔加入一抗血清100μL，37℃封閉1h。

④取下封口膜，棄去酶標(biāo)板內(nèi)溶液，用洗劑液（1×PBST）洗劑酶標(biāo)板5次，zui后一次吸干。每孔加入酶標(biāo)二抗兔抗羊IgG-HRP 100μL，37℃封閉1h。

⑤取下封口膜，棄去酶標(biāo)板內(nèi)溶液，用洗劑液（1×PBST）洗劑酶標(biāo)板5次，zui后一次吸干。每孔加底物A 50μL和底物B 50μL，震蕩混勻，室溫顯色10～15min。

⑥每孔加入終止液50μL，立刻在酶標(biāo)儀450nm波長下讀取OD值。線性范圍的影響有兩個(gè)因素：1、本身抗體的親和力，親和力越高靈敏度越高，高點(diǎn)與低點(diǎn)比值也就越高，若標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率接近于1，抗體親和力還是可以的。比值沒有相關(guān)規(guī)定說一定要高于64。

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